移液器的作用就是移液,移液的基本操作可以總結為以下六個步驟。
移液八部曲:移液器情況檢查;設定容量值;裝槍頭;預洗槍頭;吸液;排液;退槍頭;移液器清理歸位。
▼移液槍狀況檢查
很多資料上都是寫的移液器操作六部曲,但是我們認為,使用移液器首先要做的就是移液器的狀況檢查。檢驗內容可參考:刻度是否在正確位置,如果上次使用完,未調整到正確位置,就需要提醒,甚至需要重新校驗;驗證移液槍吸取的精度,經常使用移液器,都會大概知道液位的位置,要細心觀察,當然可以進行精度檢驗;觀察移液槍是否漏液的情況,對于老舊的移液器就要注意槍頭和移液器結合不緊密,導致滴液的問題;另外試用一下移液器,感覺移液器吹吸是否正常,比如有出現移液器反彈不夠利索,那就是出問題了;檢查移液器和槍頭接觸位置是否滿足你的要求,特別是在做微生物無菌操作的情況下。
再次強調移液器狀況檢查的重要性,拿一個不準確的移液器去做實驗,帶給你的只能是不準確的結果。
▼設定容量值
選定正確的移液器,在吸頭最大量程的35-100%范圍內操作可提高操作準確性與重復性。
在調節槍的過程中切忌超過最大或最小量程,以免損害移液槍的精確度。
▼放液
看了一些放液操作的介紹,其實我們認為,放液的核心就有一點:保證你吸取的液體全部進入你的體系內,并且每次的操作都是一致的。比如有人說槍頭緊貼器壁放液,這對于小體積進入大容器就是非常不可取的。因此放液沒有固定的什么方法,需要自己根據不同的情況去區別對待。
▼退槍頭
槍頭不要亂扔, 避免其進入下水道。
▼清理歸位
對照前面移液器的狀況檢查,在使用完移液器后,要將移液器調回最大量程,檢查移液器是否有污染物進入,并及時清理,將移液器放在合適的位置,避免損壞。
避免“機械回沖”,當由小量程調節至大量程時,朝所需量程方向連貫旋轉,旋轉到達超過所需量程1/3圈處再回調至所需量程,這樣可避免“機械回沖”,確保更高準確性。當由大量程調節至小量程時,直接連貫旋轉至所需量程
▼裝槍頭
正確的方法是將移液槍(器)垂直插入槍頭中,稍微用力左右微微轉動即可使其緊密結合,不要過于用力。
在將槍頭(pipette tips)套上移液槍時,很多人會使勁地在槍頭盒子上敲幾下,這是錯誤的做法,因為這樣會導致移液槍的內部配件(如彈簧)因敲擊產生的瞬時撞擊力而變得松散,甚至會導致刻度調節旋鈕卡住。
▼預洗
用同一樣品重復吸液排液二至三次。對于微量移液器,該操作有助于內壁吸附,并且可以使大量程吸頭內部的空氣等于樣品溫度,保證操作的一致性。
注意高溫或者低溫液體請不要潤洗,溫度對槍頭的內部表面積會有影響,影響槍頭的牢固程度和槍頭吸附液體的量,影響精度。
有機液體和高揮發性液體,由于其揮發會在套筒內形成負壓,從而產生漏液的情況,因此要增加預洗的次數至六次,使得套筒內氣體飽和,避免漏液。
粘稠液體,預洗要慢,要保證預洗達到實際吸取液體的位置。
▼吸液
吸取液體時注意以下幾點即可:速度適宜,減少槍頭外壁沾有液體的量,是否有空氣。
速度不能過快,過快就會吸入空氣,過快你還需要等待(特別是對于粘稠的液體),或導致吸取不準確,吸取過快還容易導致液體進入移液器內部,特別是酸堿性物質,會損壞移液器。