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1 原 理
將試樣和對照織物分別放于三角瓶中,用含有肉湯培養(yǎng)基的試驗菌懸液接種于試樣和對照織物上,經(jīng)培養(yǎng)后,分別將培養(yǎng)前后試樣上的細(xì)菌洗下,測定細(xì)菌的數(shù)量,可計算出試樣上細(xì)菌減少的百分率。該方法適用于溶出性抗菌織物抗(抑)效果的檢測。
2 實驗器材
(1)實驗菌株 金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)
(2)試樣 在距試樣布邊 10cm 以上、離布端 1m 以上部位,剪取直徑為 5cm 的圓形試樣若干(需用試樣數(shù)量要根據(jù)纖維類別及織物織法而定,以能吸收1ml 菌液且三角瓶中不留殘液為度)。另同法剪取對照織物若干,取 3 份試樣和 2 份對照織物分別裝于三角瓶中,蓋好瓶口,121℃ 15min滅菌備用
(3)肉湯培養(yǎng)基
(4)胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基
(5)磷酸鹽緩沖液(PBS,0.03mol/L,pH為7.2~7.4)
(6)恒溫水浴箱
(7)37℃培養(yǎng)箱
3 菌懸液的制備
用接種環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到營養(yǎng)瓊脂平皿上,在 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h,取平皿上典型的菌落移種到含肉湯培養(yǎng)基的三角瓶中,在 37℃條件下培養(yǎng) 24h,用肉湯對培養(yǎng)液進(jìn)行系列稀釋,使菌懸液的含菌量為 1×105cfu/mL~5×105cfu/mL。
4 試驗步驟
(1)分別取 1mL 菌懸液加在 3 份準(zhǔn)備好的三角瓶內(nèi)的織物上,確保其均勻分布,且三角瓶中不留多余液,封好瓶口,以防蒸發(fā)。
(2)分別在一個盛有試樣和對照織物的三角瓶中加入 100mL 緩沖液,劇烈搖晃 1min 洗滌細(xì)菌,取 1mL 做系列1 0倍稀釋,選適當(dāng)稀釋度以傾注法接種平皿,作為“0”接觸時間樣品和對照織物上的細(xì)菌數(shù)。
(3)將另一個裝有接種試樣的三角瓶在 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 20h±2h,然后加入 100mL緩沖液,劇烈搖晃 1min 洗滌細(xì)菌,取 1mL 做系列10倍稀釋,選適當(dāng)稀釋度以傾注法接種平皿,作為試驗組。
(4)試樣不接種菌懸液,在“0”接觸時間加入 100mL 緩沖液,劇烈搖晃 1min 取樣,接種平皿,作為陰性對照組。
(5)另取1個裝有對照織物的三角燒瓶,接種 1mL 菌懸液后,在 37℃ 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20h±2h,然后加入 100mL 緩沖液,劇烈搖晃 1min 洗滌細(xì)菌,取 1mL 做系列10倍稀釋,選適當(dāng)稀釋度以傾注法接種平皿,作為陽性對照組。
(6)將陰性和陽性對照樣本與試驗組樣本一并放入 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h,計數(shù)菌落數(shù)。
(7)試驗重復(fù)3次。
(8)結(jié)果計算
B或C或(B+C)/2-A
抑菌率(%)= ×100
B或C或(B+C)/2
試驗組試樣上的細(xì)菌數(shù); “0”接觸時間試樣上的細(xì)菌數(shù);
“0”接觸時間對照織物上的細(xì)菌數(shù);
如果“B”和“C”差別較大時,取較大值;如果“B”和“C”差別不大時,取平均值。
5 評價規(guī)定
“0”接觸時間對照織物的平均菌落數(shù)應(yīng)在 1×103cfu/mL~5×103cfu/mL。 陰性對照應(yīng)無菌生長,陽性對照菌數(shù)比“0”接觸時間的菌數(shù)明顯增加。 各次試驗的抑菌率均≥50%,即判定該樣片具有抗菌作用。
6 注意事項
對織物進(jìn)行染菌操作時,應(yīng)確保其均勻分布,且三角瓶中不沾染或存留多余菌液。 三角瓶內(nèi)的織物染菌后,應(yīng)將瓶口封好,以防液體蒸發(fā),造成細(xì)菌死亡。