電話:
021-67610176傳真:
1 原 理
本試驗將不同濃度的抑菌劑混合溶解于營養肉湯培養基中,然后接種細菌,通過細菌的生長與否,確定抑菌劑抑制受試菌生長的zui低濃度,即zui小抑菌濃度(MIC)。本方法適用于溶出性抑菌產品zui低抑菌濃度的測定。
2 實驗器材
(1)實驗菌株 金黃色葡萄球菌(ATCC 6538),大腸桿菌(8099或ATCC 11229),可根據抑菌劑的用途,選擇特定的菌株
(2)營養肉湯培養基
(3)稀釋液
(4)吸管、試管
(5)37℃恒溫培養箱。
3 操作步驟
(1)制備金黃色葡萄球菌、大腸桿菌懸液
(2)含抗菌劑培養基配制:將抗(抑)菌溶液用蒸餾水做對倍系列稀釋成不同濃度的受試液,取各稀釋度受試液 2.5mL 加入到含 2.5mL 雙倍濃度營養肉湯的試管中。
(3)取 0.1mL 含菌量約為 108
cfu/mL 菌懸液接種于含抗(抑)菌劑的營養肉湯的試管中,作為試驗組樣本。
(4)以同樣方法接種不含抗(抑)菌劑的營養肉湯的試管中,作為陽性對照組樣本。
(5)取2支含營養肉湯的試管,作為陰性對照組樣本。
(6)將試驗組樣本、陽性對照組樣本及陰性對照組樣本放置 37℃恒溫培養箱中,培養 48h,觀察結果。
(7)試驗中應將試驗用菌懸液進行活菌培養計數,其作用濃度應為 5×105cfu/mL~5×106cfu/mL。
4 評價規定
當陽性對照管有細菌生長(混濁),陰性對照管無菌生長(透明),試驗用菌懸液的作用濃度為 5×105cfu/mL~5×106cfu/mL 時, 試驗組無菌生長的zui高稀釋度所對應的抗(抑)菌劑濃度,為該樣品對受試菌的MIC。
5 注意事項
接種時,應由低抗(抑)菌劑濃度向高濃度依次接種。